目的：应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法建立一种快速、简便、高效的分枝杆菌菌种鉴定新方法，为临床医师正确诊断提供理论依据。方法以DNA直接测序法为对照，通过荧光定量PCR技术-探针熔解曲线法（包括反应A、B、C）分析22种分枝杆菌标准株、11种非分枝杆菌标准株和32株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析22种分枝杆菌标准株和11种非分枝杆菌标准株，结果与标准株DNA测序一致，成功地建立鉴定方法。32株分枝杆菌临床分离株中，经DNA测序和荧光定量PCR-探针熔解曲线法分析显示，4株为结核分枝杆菌复合群（mycobacterium tuberculosis complex， MTC），7株为胞内分枝杆菌，6株为龟分枝杆菌脓肿亚种，4株为瘰疬分枝杆菌，4株为偶然分枝杆菌，3株为堪萨斯和胃分枝杆菌，2株为戈登分枝杆菌；另有2株分离株反应A的熔解曲线显示为分枝杆菌属的熔解温度（melting temperature，Tm）值，反应B和C的熔解曲线Tm值与22株分枝杆菌标准株的Tm值均不同，经DNA测序证实与戈登分枝杆菌标准株序列不同，与报道的戈登分枝杆菌分离株一致。结论用荧光定量PCR-探针熔解曲线法可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种，提高分枝杆菌病的正确诊断率，指导临床合理用药。
作者：张俊仙；王杰；孙伟民；梁艳；阳幼荣；王兰；殷铭俊；吴雪琼
来源：中国医刊 2016 年 51卷 4期
