目的 利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCV T抗原表达质粒并进行鉴定.方法 利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的Nde Ⅰ位点,并在两端插入Bcl Ⅰ位点,通过BamH Ⅰ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCV T抗原质粒.利用酶切和DNA测序确认其DNA序列.免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCV T抗原质粒转染,用Western blot方法检测JCV T抗原的表达情况.结果 K19-JCV T抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCV T抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达.结论 同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题.
作者：夏蒲；徐小燕；贾宝萍；王薇；关一夫；高野康雄；郑华川
来源：中国医科大学学报 2010 年 39卷 1期
