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目的:观察小泛素相关修饰物(SUMO)在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化,探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法,检测SUMO1,2/3,4蛋白在正常培养的SRA01/04内的表达及分布;通过RT?PCR法,观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO 1~4 mRNA的表达变化。按浓度实验分组:葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50 mmol/L作用24 h。按时间实验分组:葡萄糖浓度50 mmol/L作用0、6、12、24 h。将GFP?SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖(50 mmol/L)处理后,转染与非转染组的细胞存活率和细胞凋亡率。结果免疫细胞化学染色结果,SUMO 1~4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核,SUMO 2/3同时少量分布于胞质;RT?PCR结果可见,与低糖组比较,高糖组随着糖浓度增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加(P<0.05);与50 mmol/L高糖处理0 h比较,随着处理时间增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加(P<0.05)。与非转染组比较,转染GFP?SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加,凋亡率降低(P<0.05)。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达,一定程度高糖诱导的氧化应激影响SUMO mRNA表达。

作者:韩笑;王欣玲;吴迪;张劲松;阎启昌

来源:中国医科大学学报 2015 年 3期

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作者:
韩笑;王欣玲;吴迪;张劲松;阎启昌
来源:
中国医科大学学报 2015 年 3期
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小泛素相关修饰物 人晶状体上皮细胞 白内障 高糖 氧化应激 small ubiquitin-related modifiers human lens epithelial cells cataract high glucose oxidative stress
目的:观察小泛素相关修饰物(SUMO)在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化,探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法,检测SUMO1,2/3,4蛋白在正常培养的SRA01/04内的表达及分布;通过RT?PCR法,观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO 1~4 mRNA的表达变化。按浓度实验分组:葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50 mmol/L作用24 h。按时间实验分组:葡萄糖浓度50 mmol/L作用0、6、12、24 h。将GFP?SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖(50 mmol/L)处理后,转染与非转染组的细胞存活率和细胞凋亡率。结果免疫细胞化学染色结果,SUMO 1~4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核,SUMO 2/3同时少量分布于胞质;RT?PCR结果可见,与低糖组比较,高糖组随着糖浓度增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加(P<0.05);与50 mmol/L高糖处理0 h比较,随着处理时间增加SUMO1~SUMO4 mRNA表达增加(P<0.05)。与非转染组比较,转染GFP?SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加,凋亡率降低(P<0.05)。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达,一定程度高糖诱导的氧化应激影响SUMO mRNA表达。