目的：构建Notch1基因胞内活化部分真核表达载体p3XFLAG?CMV7?NICD1，为进一步研究和解析Notch1基因在促进人晶状体上皮细胞间质化过程的作用做准备。方法从SRA01/04细胞中提取总RNA，RT?PCR法反转录合成cDNA。特异扩增目的基因片段NICD1，与p3XFLAG?CMV7载体连接后转化大肠杆菌DH5α，LB平板培养基筛选菌落，抽提质粒。并用酶切，测序，转染细胞后检测蛋白表达等方法验证。结果获得重组的p3XFLAG?CMV7?NICD1真核表达载体质粒，经双酶切及测序检测，NICD1基因插入载体部位正确，碱基序列正确。Western blot结果显示，在转染p3XFLAG?CMV7?NICD1的细胞中有NICD1蛋白的表达。结论 p3XFLAG?CMV7?NICD1真核表达载体质粒构建成功，为进一步研究Notch1传导通路与白内障摘除术后发生后囊膜混浊的关系奠定基础。
作者：刘蕾；肖伟
来源：中国医科大学学报 2015 年 3期
