目的：观察 BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响，探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞，分为正常组（pH 7．4）、酸化组（pH 6．0）、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组，激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化，实时荧光定量 PCR 法检测细胞自噬基因 Beclin-1、ULK1 mRNA的表达，Western blot法检测自噬蛋白 LC3的表达，吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与 pH 7．4正常组比较，pH 6．0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内 Ca2＋的浓度，且自噬标志物 Bec-lin-1、ULK1 mRNA 及 LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高，酸性自噬溶酶体形成增多，同时酸化刺激能引起 CaMKKβ及 p-AMPK蛋白表达水平增高，磷酸化蛋白 p-mTOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和 CaMKKβ及 p-AMPK 表达明显降低，p-mTOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用，其机制可能与抑制胞内Ca2＋有关。
作者：高文凡；陈飞虎；葛金芳；邓子云；雷静；周仁鹏；王志森
来源：中国药理学通报 2015 年 5期
