目的:探讨大黄素(EM)在转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化相关蛋白表达的机制.方法: HK-2细胞随机分为正常对照组、TGF-β1刺激的模型对照组和大黄素( TGF-β1+EM)组.采用ELISA法检测培养细胞上清液中Collage Ⅰ和Fibronectin的含量. TGF-β1刺激HK-2细胞24 h后收集细胞用于免疫荧光、免疫印迹Western Blot和实时荧光定量PCR( RT-PCR)分析. Western Blot印迹法分别检测Akt/mTOR通路蛋白PI3K、p-Akt和mTOR的表达;RT-PCR法分别检测Akt/mTOR通路蛋白PI3K、p-Akt和mTOR mRNA的表达;免疫荧光检测PI3K在HK-2细胞模型中的表达.结果:与模型对照组相比,大黄素组细胞培养液上清中CollageⅠ和Fibronectin的含量明显减少(P<0. 05);抑制PI3K蛋白表达水平增加,降低其下游 p-Akt 蛋白表达,进而降低下游 mTOR 蛋白表达,差异有统计学意义(P <0.05);PI3K、p-Akt 和mTOR mRNA的表达水平降低,差异有统计学意义(P<0. 05);PI3K荧光表达减少.结论: 大黄素干预TGF-β1诱导的HK-2细胞纤维化模型后,可以通过抑制自噬经典Akt/mTOR通路,对细胞损伤有缓解作用,为进一步探索其机制奠定基础.
作者：窦芳；丁一；楚建杰；李韦韦；张伟；宁泽琼；赵先；王婧雯；文爱东
来源：中国药师 2018 年 21卷 10期
