目的 构建Smad-7基因真核表达载体并筛选获得其稳定表达细胞系,观察Smad-7拮抗TGF-β1对人肾系膜细胞(HMC)的影响.方法 用PCR方法从胎肝cDNA文库扩增Smad-7编码序列,将其构入真核表达载体pcDNA3.1/mye-his-B(-),酶切及测序鉴定重组质粒.重组质粒转染HMC细胞,G418筛选获得Smad-7的稳定表达细胞克隆,运用Western Blotting验证目的 基因表达.运用MTT和流式细胞术检测稳定表达Smad-7对TGF-β1诱导的拮抗作用.结果 酶切和测序证实目的 基因被克隆入表达栽体,Western Blotting证实目的 基因成功表达,获得稳定表达Smad-7的细胞克隆;Smad-7过表达可明显缓解TGF-β1对HMC细胞的生长抑制、细胞周期G1阻滞作用,并可降低TGF-β1对HMC细胞的凋亡诱导作用.结论 成功构建Smad-7真核表达载体并获得其稳定表达细胞克隆,过表达Smad-7可拮抗TGF-β1对HMC细胞的影响. .
作者：周平；李洁；方建珍
来源：中国医师杂志 2008 年 10卷 7期
