目的 建立多重PCR反向斑点杂交方法(PCR-RDB)技术快速检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒,以便及时监测并快速诊断急性病毒性呼吸道感染.方法 参照国家生物技术信息中心(NCBI)数据库病毒核酸序列设计多重PCR引物和探针,将特异的寡核苷酸探针固定于尼龙膜上.利用多重PCR对人博卡病毒(hBOV)、KI多瘤病毒(KI)、腺病毒(AdV)、WU多瘤病毒(WUPyV)、入细小病毒B19(HPVBI9)等5种DNA病毒进行扩增,扩增产物变性后与各特异性探针进行杂交、显色并分析结果,并对其敏感性、特异性进行测试.同时通过反向斑点杂交检测108例临床标本的多重PCR产物,并与培养法结果做对比分析.结果 建立的多重PCR-RDB方法各特异探针只相应扩增产物杂交,与其他病原体无交叉反应,敏感性达1 CFU.108例临床咽拭子标本PCR-RDB方法共筛选出阳性37例(34.26％),高于临床常规检测方法的30例(27.78％).结论 应用多重PCR-RDB技术可简便、快速、准确地检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒,具有很好的临床应用前景.
作者：田海清；曾跃红；王新华；周勇军
来源：中国医师杂志 2015 年 17卷 1期
