目的：通过观察SIRT1全长（SIRT1-FL）及缺失第8外显子的SIRT1选择性剪接变异体（SIRT1-ΔExon8）在D-半乳糖诱导的293T细胞衰老模型中的表达变化，初步探讨SIRT1全长及SIRT1-ΔExon8对细胞衰老进程的影响。方法①细胞计数kit-8（CCK8）法测定不同浓度D-半乳糖（0，5，10，15，20 g/L）对293T细胞活力的影响。②用含10 g/L的D-半乳糖达氏修正伊氏培养基作用于第3代293T细胞，继续培养至第6代，建立细胞衰老模型，β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色观察衰老细胞阳性率。③实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测诱导组与对照组细胞中SIRT1-FL及SIRT1-ΔExon8 mRNA的表达水平。结果①CCK-8结果显示10 g/L的D-半乳糖能诱导细胞衰老且不引起细胞过度损伤。②诱导组衰老细胞阳性率（74.2±3.6）％高于对照组（7.7±1.4）％（P＜0.05）。③RT-PCR结果显示诱导组SIRT1-FL和SIRT1-ΔExon8 mRNA表达水平分别较对照组降低了（78.26±0.05）％和（88.03±0.03）％（P＜0.05）。结论①SA-β-gal染色结果提示D-半乳糖诱导293T细胞衰老模型建立成功。②衰老细胞组的SIRT1-FL和SIRT1-ΔExon8mRNA表达水平较对照组均显著降低，提示SIRT1-FL及SIRT1-ΔExon8可能参与调控细胞衰老的进程。
作者：王玥；杨小荣；张策
来源：中国药物与临床 2015 年 8期
