目的 由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的结核病(tuberculosis,TB)是全球第二大单一感染致死病因,快速和准确的结核诊断技术有助于对其进行精准防控.方法 针对MTB菌株插入序列IS6110高度保守区域设计引物和exo探针并进行筛选,建立了 MTB实时(real-time,RT)荧光重组酶介导的等温扩增(recombi-nase-aided amplification,RAA)检测方法.通过检测11种非结核分枝杆菌以及金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌评价RT-RAA方法的特异性.以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)方法作为平行对照,应用RT-RAA方法扩增梯度稀释的含有目的基因序列不同拷贝数的重组质粒pEASY-Blunt-IS6110,以评价RT-RAA方法的检测敏感度和重复性.将建立的MTB RT-RAA方法应用于173份肺结核临床样品检测中,同时与qPCR方法进行比较.结果 建立的MTB RT-RAA方法在42℃条件下30min内即可完成反应;与非结核分枝杆菌以及金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌均无交叉反应;最低检测模板质粒浓度为116拷贝/2μl,优于qPCR方法(138拷贝/2μl);组内和组间的变异系数均小于8％,重复性好.对于肺结核临床样品的检测,RT-RAA方法检测的阳性率与qPCR方法差异无统计学意义.结

作者：刘园园；任卫聪；薛仲探；王伟；张旭霞；姚丛；尚媛媛；李姗姗；逄宇

来源：中国医学前沿杂志（电子版） 2023 年 15卷 8期