铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险.将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体pET-28a中,然后转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21 (DE3),经过筛选获得工程菌Ecoli (add).经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活力测定,表明E coli (add)能够表达大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是含空载质粒的BL21 (DE3)菌株E.coli (pET-28a)的16.2倍.以Ecoli (add)制备的粗酶液为催化剂,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷发生脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8％.
作者：黎梦；刘国生；刘磊；常利草；邢善涛
来源：中国医药工业杂志 2017 年 48卷 11期
