目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)融合蛋白6811ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性.方法 根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列(NM_010478)合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a(+)-6811ScFv质粒后转化入E.coli DH5a,获得pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70重组质粒.将鉴定正确的pET30a(+)-6811ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),获得E.coli BL21(DE3)[pET30a(+).6811ScFv/mHSP70]重组菌株.以异内基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法 进行鉴定和免疫活性检测.结果 6811ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符.SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符.复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9
作者：张果；昌晓红；石菁菁；成夜霞；李巍；叶雪；程洪艳；付天云；魏丽惠；崔恒
来源：中国医药生物技术 2008 年 3卷 5期
