目的联合应用 LR 克隆酶和链霉菌噬菌体ΦC31整合酶系统，建立一种获得位点特异整合型微环 DNA 的方法，为该载体在转基因研究中的应用提供科学资料。<br> 方法应用分子克隆技术，在目的基因表达盒及链霉菌attB 位点两端接入λattR 和λattL 片段，随后插入ΦC31整合酶基因表达盒，构建可获得微环 DNA 的亲本质粒。该亲本质粒上的λattL 和λattR 序列可在 LR 克隆酶的催化下重组生成表达ΦC31整合酶的微质粒和含有目的基因表达盒及 attB 位点的微环 DNA。以限制性内切酶酶切、定性以及定量 PCR 分析其重组效率。并将未经纯化的 LR重组体系转染 HeLa 细胞，以流式细胞技术、克隆计数、ELISA 等方法检测其转染率、整合率及目的蛋白表达水平，并与传统质粒进行比较。<br> 结果 LR 克隆酶可有效催化亲本质粒的重组，重组率达80
作者：刘浏；周在威；马晴雯
来源：中国医药生物技术 2014 年 1期
