目的：构建大容量人源 Fab 噬菌体库，筛选并鉴定抗CD276的特异性抗体。方法通过采集10位健康成人的外周血淋巴细胞，提取总RNA，利用 RT-PCR 扩增人 Fab 抗体基因片段，插入噬菌体载体 pCANTAB5H 中，构建人源 Fab 噬菌体抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后，随机挑取96个单克隆进行 phage-ELISA 鉴定，筛选出与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为5×1010的噬菌体抗体库，从中筛选到11株阳性克隆，对其进行测序鉴定，表明该11株克隆的序列均一致，ELISA 证实其对抗原 CD276具有较强的结合性。结论构建了大容量人源 Fab 抗体库，从中获得具有抗CD276的人源 Fab 抗体片段，为进一步的研究和应用提供实验基础。
作者：刘婕；陈俊亨；徐天殊；王丽萍；赵琦
来源：中国医药生物技术 2014 年 4期
