目的构建人抑瘤素 M（OSM）的原核表达载体，通过表达及纯化获得重组蛋白，为深入研究 OSM 的功能及机制奠定基础。<br> 方法利用 PCR 技术，从质粒 pOTB7-hOSM 中扩增出人OSM 蛋白编码序列，与原核表达载体 pET-16b 连接，构建表达质粒 pET16b-OSM。在 BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白，Western blot 法检测 OSM 蛋白的表达。为提高OSM 的可溶性表达，采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后，经镍亲和层析法纯化，获得 OSM 成熟蛋白，SDS-PAGE 电泳分析蛋白纯度。MTT 法检测 OSM 对 A375细胞的抑制活性，实时荧光定量 PCR 试验分析 OSM 对 HepG2细胞中胆固醇代谢相关基因（LDLR、ABCA1、ApoA-I 和 SR-BI）表达的影响。<br> 结果成功构建 pET16b-OSM 原核表达质粒，酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在 E. coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达，通过共表达分子伴侣质粒 pTf16，进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得 OSM 成熟肽，电泳检测纯度大于98
作者：杜郁；贾晓健；袁芳；王丽；王丽非；洪斌
来源：中国医药生物技术 2015 年 3期
