目的:获取实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠小胶质细胞,并检测其特性。方法取8周龄,雌性 C57BL/6小鼠行 EAE造模,待至发病高峰期(第15天)时以 PBS灌注后取小鼠后脑和脊髓,切碎后加胰酶消化,消化完成后通过100μm滤网滤过,而后采用 Percoll密度梯度离心法分离获取单个核细胞,进一步利用 CD11b与 CD45抗体染色,通过流式细胞仪分选 CD11b+CD45high和 CD11b+CD45low细胞,即分别得到相对活化和静息的小胶质细胞,最后对流式分选获取的小胶质细胞行 qPCR检测。结果通过形态比较,获得了高纯度的小胶质细胞。FIZZ-1基因行qPCR检测,结果显示在 EAE急性期 M2型小胶质细胞明显增多,符合文献报道。结论该方法能从 EAE小鼠体内分离获取高纯度的小胶质细胞,可用于相关目的基因后续检测。
作者:浦颖艳;孙定亚;黄爱军;曹莉
来源:中国医药生物技术 2016 年 11卷 4期