目的 从杨梅中分离鉴定糖基转移酶基因,进行其生物催化特性研究并应用于天然产物的糖基化修饰.方法 利用转录组测序分析从杨梅叶片中获得编码糖基转移酶的Unigenes,再结合RT-PCR方法克隆获得该目标基因的cDNA,然后构建表达载体并在大肠杆菌中进行异源表达,利用体外的酶促反应进行其生物催化活性研究.结果 从杨梅叶片中提取总RNA,经转录组高通量测序和生物信息学分析获得编码糖基转移酶UGT71AN1基因;利用大肠杆菌进行异源表达并纯化获得融合蛋白,该酶能催化槲皮素、山奈酚、紫铆因、棕矢车菊素、原花青素和圣草酚等黄酮类化合物合成相应的葡萄糖苷;利用质谱和NMR对合成的糖苷进行结构鉴定,确定了槲皮素-3'-O-葡萄糖的糖苷键结构.结论 克隆获得一个具有催化黄酮类化合物形成葡萄糖苷的糖基转移酶基因,可利用酶促或全细胞生物催化进行黄酮类天然产物的糖基化结构修饰.
作者：唐铭袈；杨燕；王宇；刘忞之；王伟
来源：中国医药生物技术 2019 年 14卷 5期
