目的 建立测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品.方法 分别将扩增培养后的永生化的人细胞系、培养达到108数量级的转染HPV11质粒的细菌、大肠杆菌和欧陆森氏菌高GC菌株收集后提取基因组DNA,然后进行DNA浓度测定.接着将人基因组DNA、HPV病毒基因组DNA、大肠杆菌基因组DNA和高GC菌株基因组DNA分别按照20、5、50、50 ng/μl终浓度要求,进行分装,制备国家参考品.在不同的基因测序仪进行上机测序,包括BGISEQ-500、NextSeq CN500、NovaSeq 6000和BioelectronSeq 4000等.构建人全基因组变异标准集和一致性序列.采用不同测序平台进行协作标定,评价变异标准集和一致性序列的适用性.结果 制备的国家参考品经不同平台测序后构建了人全基因组变异标准集和一致性序列.经过不同测序平台标定,结果符合人全基因组变异标准集和一致性序列的要求.结论 测序仪性能评价用脱氧核糖核酸国家参考品可以用于高通量基因测序仪的性能评价,为产品注册检定及上市后监督管理提供依据.
作者:曲守方;黄传峰;孙楠;于婷;黄杰
来源:中国医药生物技术 2021 年 16卷 4期