目的:构建人膀胱癌BLZ211细胞表达型cDNA文库,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础.方法:提取BLZ211细胞总RNA,分离mRNA.反转录合成双链cDNA,削平cDNA末端,连接EcoRI适配子,磷酸化EcoRl适配子5'端,XhoI酶切,Sephaeryl-S400柱除去小于400bp cDNA片段,与λZAP表达栽体连接,包装蛋白包装后建成eDNA文库;取出1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1-Blue-MRF',测定文库大小、重组率;随机挑取7个噬斑,在ExAssist辅助性噬茼体的作用下,释放出PBK-CMV噬菌粒;感染大肠杆菌XLOLR,铺于卡那霉素抗性的JB平板;挑取克隆,37℃震摇过夜;抽提质粒,经EcoRI和XhoI酶切后,初步确定片段的大小及多样性.结果:构建成含1.39×106重组子的BLZ211细胞cDNA文库,重组子平均插入外源片段长约1.3kb.结论:所建文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆.
作者：陈玲；李旭；陈葳
来源：中国医院用药评价与分析 2007 年 7卷 1期
