目的 通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响.方法 通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框(ORF)及其上下游约1000bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克隆到穿梭质粒pRG3-AMAI-Notl;用重组后的质粒和空质粒转化烟曲霉嘧啶营养缺陷株(pyrG-) AF-293.1,并利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI) M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定转化株对两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、伏立康哇(VRC)、泊沙康唑(POS)和卡泊芬净(CAS)敏感性.结果 黄曲霉cyp51同源基因有3个:cyp51A,cyp5lB和cyp5lC,ORF大小约为1400-2000bp;将其克隆到穿梭质粒pRG3-AMAI-Notl产生重组质粒pRG3-AMAI-CYP51A,pRG3-AMAI-CYP51 B和pRG3-AMAI-CYP51C;连同空质粒转化AF293.1后得到阳性转化子rCYP51 A,rCYP51 B,iCYP51 C和rpRG;微量液基稀释法和E-test法显示,rCYP51 A和rCYP51 B对VRC和ITC交叉耐药,对AMB和CAS敏感;rcyp51C和rpRG对VRC和ITC中度敏感,而对AMB和CAS敏感.结论 额外拷贝黄曲霉cyp51A或cyp51B基因影响烟曲霉对唑类药物的敏感性,对AMB和CAS的敏感性没有影响;额外拷贝黄曲霉cyp51C对测试药物的敏感性没有明显影响.

作者：刘伟霞；孙毅；万喆；李若瑜；刘伟

来源：中国真菌学杂志 2011 年 06卷 1期