目的:探讨Bcl-x mRNA前体剪接转换寡核苷酸(Bcl-x splice-switching oligonucleotides,Bcl-x SSO)对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法:设计靶向Bcl-x基因下游选择性5 '端剪接位点的Bcl-x SSO,β-globin SSO作为阴性对照SSO.SSO经2'-甲氧乙基(2'-O-methoxyethyl,MOE)、全硫代磷酸化(phosphorothioate,PS)修饰.采用阳离子脂质体将不同的SSO转染至U251细胞.采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测Bcl-x SSO对U251细胞的增殖抑制率.流式细胞术定量检测U251细胞的凋亡率.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS mRNA表达水平的影响,Western blot方法检测Bcl-x SSO对Bcl-xL、Bcl-xS蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示Bcl-x SSO显著抑制U251细胞的增殖,且抑制作用呈剂量依赖性.流式细胞术检测Bcl-x SSO能够明显促进U251细胞凋亡.RT-PCR检测Bcl-x SSO处理组Bcl-xL mRNA表达水平下降,Bcl-xS mRNA表达水平升高.Western blot检测Bcl-x SSO处理组Bcl-xL蛋白表达水平下降,Bcl-xS蛋白表达水平升高.结论:在胶质瘤细胞U251中,Bcl-x SSO可特异性的作用于Bcl-x mRNA前体,调节其选择性剪接模式从Bcl-xL转换至Bcl-xS,进而促进U251细胞凋亡.
作者:李朝晖;田男;付红;李妍哲;韩亮;田宇
来源:中国肿瘤临床 2014 年 41卷 6期