目的 探讨缺氧条件下,转基因细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达变化以及单纯疱疹病毒1-胸苷激酶(HSV1-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统对转基因细胞的特异杀伤作用.方法 以缺氧诱导因子-1/缺氧反应元件(HIF-1/HRE)基因调节系统为载体,采用DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含人反义VEGF165cDNA全长和HSV1-TK基因的真核表达质粒,将其稳定转染人骨肉瘤细胞系MG63.应用PCR和RT-PCR方法检测TK基因的整合及转录;用MTY法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧条件下对GCV的敏感性以及HSV1-TK/GCV系统的"旁观者效应";ELISA法检测细胞在缺氧条件下VEGF表达变化;流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化.结果 成功构建了由HRE启动子驱动的含反义VEGF165 cDNA全长和潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(HyTK)基因的真核表达质粒pBI-HRE-AsVEGF165-HyTK;得到转基因细胞系MG63TV;检测到MG63TV细胞内TK基因的DNA和mRNA.缺氧条件下,转基因细胞存活率与GCV浓度呈现剂量依赖性,对GCV的敏感性提高了100倍;HSV1-TK/GCV系统旁观者效应明显增强;肿瘤细胞VEGF分泌下降50
作者：王燕；乔慧；彭挺生；李扬；张萌；梁惠珍；丘钜世
来源：中华病理学杂志 2007 年 36卷 3期
