目的 探讨肿瘤转移抑制基因1(TMSG-1)的基因转录调控机制.方法 PCR扩增TMSG-1转录起始位点上游-271 bP与下游+303 bp之间不同长度片段,连入荧光素酶报告基因质粒pGL3-basic,各重组质粒转染后对表达的荧光素酶活性进行检测;对重组质粒pGL3-237插入DNA序列的潜在转录因子结合位点进行定点突变,然后检测其荧光素酶活性的变化;运用凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀验证转录因子KLF6和Sp1与TMSG-1DNA调控区的相互作用;通过免疫共沉淀实验分析转录因子KLF6和Sp1之间的相互作用;对人前列腺癌PC-3M不同转移潜能亚系PC-3M-1E8、PC-3M-2B4,人肺巨细胞癌PG不同转移潜能亚系PG-BE1、PG-LH7通过荧光定量PCR分析TMSG-1和野生型KLF6 mRNA水平;将KLF6真核表达质粒转染PC-3M-2B4后检测TMSG-1蛋白水平及细胞侵袭能力的变化.结果 通过荧光素酶报告基因实验鉴定出TMSG-1基因第1号外显子内存在明显促进基因转录的调控区域+59～+123 bp.对该区域序列定点突变后重组荧光素酶报告基因表达的荧光素酶活性下降,而共转染未突变的荧光素酶报告基因质粒和KLF6或Sp1的真核表达质粒则荧光素酶活性上升,差异具有统计学意义(P＜0.01).凝胶迁移阻滞和染色质免疫共沉淀结果显示,转录因子KLF6和Sp1与该区域特定序列存在相互作用.免疫共沉淀结果
作者：龚苗子；由江峰；裴斐；崔湘霖；李刚；郑杰
来源：中华病理学杂志 2011 年 40卷 8期
