目的探索C基因截短型重组HBV载体的复制、包装和表达.方法采用分子克隆、定点突变技术构建C基因截短型HBV载体;瞬时转染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察外源目的基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达;提取转染细胞胞内、胞外DNA分别进行半巢式聚合酶链反应(PCR)、非变性凝胶电泳杂交技术、southern blot杂交定量分析及常规PCR等分析,检测重组HBV载体的复制、包装及子代病毒的生成.结果经酶切鉴定,C基因截短型HBV载体构建成功;转染HepG2细胞,外源目的基因能够高效表达;在辅助载体的辅助下,C基因截短型HBV载体能够在肝细胞进行复制,包装,通过定量分析,C基因截短型HBV载体的包装效率比C基因非截短型HBV载体提高4～8倍;另外,C基因截短型HBV载体可以在辅助载体的辅助下包装成携带外源目的基因的子代病毒颗粒分泌到胞外.结论C基因部分截短不影响HBV载体外源基因的表达和病毒的复制,而且可以提高载体的包装效率.
作者：韩聚强；胡大荣；孙殿兴；胡学玲；李娟；范公忍；刘超英；吴忆贫
来源：中华传染病杂志 2004 年 22卷 1期
