目的获得 D型沙眼衣原体多形外膜蛋白(Pmp )I的全长(PmpI‐FL )和羧基端蛋白(PmpI‐C),并鉴定蛋白免疫原性。方法用PCR扩增目的基因PmpI‐FL和PmpI‐C ,分别将其定向插入原核表达载体pGEX‐6P‐1中,连接产物转化入大肠埃希菌DH5α,提取质粒进行酶切、PCR、测序鉴定。再将重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定目的蛋白,谷胱甘肽巯基转移酶(GST )磁珠分别纯化PmpI‐FL‐GST融合蛋白和PmpI‐C‐GST 融合蛋白。用纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠,ELISA测定抗体效价。结果克隆目的基因 PmpI‐FL和 PmpI‐C的长度分别为2659和1195 bp ,序列均与基因库中一致,考马斯亮蓝染色和免疫印迹显示目的蛋白相对分子质量分别约为122000和69000;并得到纯化的蛋白。免疫小鼠所得血清经ELISA检测多克隆抗体效价达1∶12800(抗PmpI‐FL)和1∶6400(抗PmpI‐C)。结论成功表达具有强免疫原性的PmpI‐FL‐GST和PmpI‐C‐GST两种融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础。
作者:盛彩虹;孙毅娜;孔杰;马璟玥;齐蔓莉;韩珑;那德木;刘全忠;刘原君
来源:中华传染病杂志 2016 年 34卷 11期