目的 在真核细胞中表达Zhejiang Children's Hospital(ZCH)-7-2F9(简称2F9)单链抗体(scFv2F9)以获得高活性的目的 蛋白,为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础.方法 根据pSectag2A多克隆位点、(G4S)3及scFv2F9基因序列,设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6xHis以及终止密码TGA的引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拼接法(splicing by overlapextension,SOE)扩增克隆到scFv2F9基因,将扩增到的目的 基因片段克隆到pGEM T-easy载体,测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中.阳性重组质粒pSectag2A/scFv2F9转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞进行目的 蛋白的瞬时表达,将培养上清浓缩后,流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果.结果 真核分泌型表达载体pSectag2A/scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达,其相对分子质量为31 000.亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90.02
作者：宁铂涛；汤永民；CAO Jiang；沈红强；钱柏芹
来源：中华儿科杂志 2008 年 46卷 8期
