目的 了解外源性人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7基因对子宫颈癌细胞周期的影响.方法 从宫颈癌标本中经PCR扩增回收HPV16E7基因片段,将正确的E7基因片段插入到穿梭质粒pAdTrack-CMV中,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌Bj5183中同源重组,重组腺病毒质粒转染人胚肾细胞株HEK-293细胞,包装表达E7基因的腺病毒,然后转染HPV18阳性的宫颈癌细胞株HeLa细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后HeLa细胞的增殖情况,以吸光度(A)值表示;流式细胞仪检测转染前后HeLa细胞的细胞周期和细胞周期蛋白D1表达的变化.结果 在HEK-293细胞中,可以收获高转染效率的腺病毒.在荧光显微镜下,可以观察到HEK-293细胞和HeLa细胞中均有绿色荧光蛋白的表达.提取HEK-293细胞RNA,RT-PCR技术可以检测到E7基因的表达.MTT比色法检测结果显示,转染后HeLa细胞的A值最低为0.38±0.02,最高为0.96±0.01,分别与转染前的0.27±0.03比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞仪检测结果显示,转染12 h后,S期细胞占(36.0±2.0)
作者：戴淑真；孔守芳；黄丽丽；罗兵
来源：中华妇产科杂志 2006 年 41卷 9期
