目的 探讨XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响.方法 针对XPG mRNA的不同区域设计不同的小分子干扰RNA( siRNA)片段(共3个,包括siRNA-XPG-733、1279和3227),瞬时转染卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP细胞,实时荧光定量PCR技术检测瞬时转染后SKOV3/DDP细胞中XPG mRNA的表达；选择对XPG mRNA表达抑制率最高的siRNA-XPG干扰片段,构建短发夹状RNA(shRNA)-XPG重组表达载体,转染SKOV3/DDP细胞；采用氨基糖甙类抗生素G418筛选、蛋白印迹法鉴定,确认获得XPG基因表达下调的shRNA-XPG-SKOV3/DDP细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测shRNA-XPG-SKOV3/DDP细胞增殖情况和顺铂耐药性,采用流式细胞仪和高效液相色谱法分别检测其细胞周期比例和细胞内顺铂浓度,转染以内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) siRNA构建的shRNA-GAPDH重组表达载体的SKOV3/DDP细胞为阳性对照,转染以XPG无关序列构建的shRNA-NC重组表达载体的SKOV3/DDP细胞为阴性对照.结果 (1)实时荧光定量PCR技术检测显示,siRNA-XPG-733干扰片段转染后SKOV3/DDP细胞中XPG mRNA的表达水平最低,对XPG mRNA表达抑制率最高,达53.8％.构建shRNA-XPG-733重组表达载体,转染SKOV3/DDP细胞,获得shRNA-XPG-733-SKOV3/DDP细胞,该细胞中XPG

作者：张玮；吴飞翔；王琪；李力

来源：中华妇产科杂志 2012 年 47卷 4期