目的:建立顺铂耐药性稳定的卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞株及其裸鼠移植瘤模型并探讨其耐药特性,为研究体内微环境耐药机制及逆转靶基因筛选奠定基础。方法采用体内外交叉诱导和连续体内诱导两种方法,以绿色荧光蛋白(GFP)标记的卵巢癌细胞株SKOV3/GFP分别建立两株顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/DDPⅠ(为耐药细胞的对照)和SKOV3/DDPⅡ及其裸鼠移植瘤模型。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测细胞耐药指数,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期比例,高效液相色谱仪检测细胞内顺铂积量;透射电镜观察移植瘤组织的超微结构,实时荧光定量PCR技术检测移植瘤组织中铂类耐药相关基因--PTEN、STAT5、XIAP、BRCA1和MDR1 mRNA的表达水平。结果成功构建顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDPⅠ和SKOV3/DDPⅡ及其裸鼠移植瘤模型。MTT比色法和流式细胞仪检测显示,SKOV3/DDPⅡ细胞的耐药指数分别为2.83±0.12和3.82±0.19,SKOV3/DDPⅠ细胞的耐药指数分别为2.20±0.16和3.40±0.20,两种检测方法分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,29.7和39.6μmol/L顺铂处理36 h后, SKOV3/DDPⅠ、SKOV3/DDPⅡ细胞的凋亡率[分别为(57.0±1.4)
作者:石丽君;于红静;张玮;李力;王琪
来源:中华妇产科杂志 2014 年 7期