目的 探讨自然杀伤(NK)细胞的体外扩增及对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的杀伤作用.方法 (1)NK细胞的体外扩增及表型鉴定:收集2015年11月北京大学人民医院1名健康志愿者捐赠的外周血20 ml,分离外周血淋巴细胞,采用转染后过度表达白细胞介素21(IL-21)的慢性髓系白血病细胞系K562细胞(IL-21-K562细胞)作为饲养细胞(经放射线照射),与外周血中分离的淋巴细胞混合培养,体外诱导、扩增培养14 d,监测扩增过程中淋巴细胞数量和存活细胞比例的变化,14 d后收获扩增的淋巴细胞并计数,采用流式细胞仪鉴定扩增的淋巴细胞中NK细胞比例(其表型为CD3CD56+).(2)NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用:效应细胞(即NK细胞)与靶细胞(即卵巢癌细胞系SKOV3、HOC1A、3AO、CAOV3细胞及其对照K562细胞和正常卵巢上皮细胞系T29细胞)的比值(效靶比)分别为50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用.结果 (1)NK细胞的体外扩增及表型鉴定结果:体外诱导、扩增培养14d,淋巴细胞数从扩增当天(第0天)的2.0× 107个至第14天时为5.1×109个,扩增后淋巴细胞数增加至扩增前的255倍;存活细胞比例从扩增当天的95％以上降至第8天的80％左右,随后逐渐升高,至第14天时又达95％以上.扩增前、后表型为CD3-CD5
作者：程洪艳；叶雪；马瑞琼；昌晓红；崔恒
来源：中华妇产科杂志 2017 年 52卷 8期
