目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响.方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞.用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达.设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组.各组细胞分别接受不同剂量6MVX射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率.每组实验重复3次.结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P＜0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)％和(70.42±1.18)％;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞D0、Dq、N和SF2值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P＜0.01),放射增敏比(SER)为1.27.流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G2/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P＜0.01),经10 Gy X射线照射,G2/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P＜0.01).两者联合使用后G2/M期阻滞更加明显.siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+ IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P＜0.01);PK

作者：袁素娟；乔田奎；庄喜兵；陈伟；邢娜；张琪

来源：中华放射医学与防护杂志 2015 年 35卷 6期