目的 研究anti-AFP scFv(抗AFP单链抗体)介导的慢病毒(lentivirus)载体对表达AFP肝癌细胞特异性基因转移以及双靶点基因系统对肝癌细胞生长的抑制作用.方法 用脂质体Lipofectamine 2000将目的基因转移载体、包装结构及包膜结构质粒共转染包装细胞293T,大量收集病毒上清,过滤、浓缩.用携带AFP-WtP53-pPRIME-miR30-shRNA-IGF1R融合基因的慢病毒体外转染培养的肝癌细胞HEP3B.荧光显微镜下观察感染效果,用PCR、Western blotting鉴定WtP53、miR30-shRNA-IGF1R在细胞中的整合转录结果.CCK8观察重组慢病毒对肝癌细胞生长的影响,TUNEL检测细胞凋亡.结果 成功构建anti-AFP scFv介导的慢病毒；滴度为4.58×109 PFU/ml;PCR、Western blotting均显示阳性条带,证明anti-AFP scFv介导的慢病毒在靶细胞中整合且转录表达.重组慢病毒对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用且有促进细胞凋亡的作用.结论 anti-AFPscFv介导的慢病毒可将双靶点基因系统高效靶向性转染、杀伤肝癌细胞.
作者：牛坚；赵何伟；王文；于彬；刘斌；王学浩；张业伟
来源：中华肝胆外科杂志 2012 年 18卷 5期
