目的 探讨四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制.方法 利用前期构建的TSPAN8 shRNAs慢病毒质粒并筛选稳转细胞株MHCC97-H-LV-GFP-shRNA-Tspan8,沉默Tspan8基因表达.WST法检测细胞增殖变化;蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶12表达改变;应用Transwell检测细胞侵袭能力变化;5.0×106肝癌细胞肝内注射行体内实验,检测肿瘤生长及肺转移情况.在层黏蛋白-5(laminin-5)作用于肝癌细胞株MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-shRNA-Tspan8两天后,观察2组细胞形态差异,是否发生EMT改变并检测上皮及间质分子标志物.进一步应用免疫共沉淀和荧光分析Tspan8可否与整合素α6形成复合物.结果 体内外实验显示,与Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)比较,Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H和对照组MHCC97-H-Mock(LV-GFP)增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强(P＜0.05).MHCC97-H-shRNA-Tspan8细胞中MMP-12表达抑制明显,细胞侵袭能力明显下降.进一步的研究显示:在层黏蛋白-5的诱导下四跨膜蛋白Tspan8可与α6结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97-H发生上皮间质转化,而在RNA干扰组肝癌细胞中(MHCC97-H-shRNA-Tspan8)未见发生;免疫共沉淀显示Tspan8可与α6结合形成复合物,提示Tspan8偶联α6后形成复

作者：武金才；周开伦；陈家诚；陈良；唐荣；陈骋；许达峰；郑进方；张震生

来源：中华肝胆外科杂志 2016 年 22卷 11期