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目的 探讨周期性机械应力条件下胰岛素样生长因子1型受体( IGF1R)对大鼠软骨细胞增殖及细胞外基质合成的影响.方法 体外分离培养大鼠软骨细胞,随机分为4组:加压0h组、加压0.5 h组、加压1 h组、加压2 h组,采用Western Blot法检测各组细胞IGF1R的表达及磷酸化水平,并在此基础上将同代无处理的软骨细胞在加压各组检测的同时给予同样检测即为静态组,应用Gel-Pro Analyzer软件进行半定量灰度分析比较各时间段静态和加压两两各组磷酸化 IGF1R/总IGF1R水平差异.另取大鼠软骨细胞随机分为静态组、加压对照组、IGF1R阻断组、加压后IGF1R阻断组,IGF1R阻断采用顺式-3-[8-胺基-1-(2-苯基-喹啉-7-基)-咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-1-甲基-环丁醇(OSI-906)或者以IGF1R shRNA两种方式.阻断IGF1R 1 h后Western Blot法检测各组细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)表达及磷酸化水平;8 h后实时荧光定量PCR检测各组2型胶原(collagenⅡ)、蛋白聚糖(aggrecan)表达;3 d后采用直接细胞计数方式及细胞计数试剂盒(CCK-8)对软骨细胞增殖状况进行测定.应用SPSS 18 .0软件进行相关统计学分析,两组间差异采用t检验比较.结果 磷酸化IGF1R/总IGF1R蛋白水平在加压0 h组与静态组之间差异无统计学意义(t=0 .255, P=0 .811),而在0 .5 h组,1

作者:葛雨庆;梁文卫;刘久翔;陈桂文;孙成;程蒋琪;刘锋

来源:中华关节外科杂志(电子版) 2018 年 12卷 2期

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作者:
葛雨庆;梁文卫;刘久翔;陈桂文;孙成;程蒋琪;刘锋
来源:
中华关节外科杂志(电子版) 2018 年 12卷 2期
标签:
力学 受体,胰岛素样生长因子Ⅰ 软骨细胞 Mechanics Receptor,IGF type 1 Chondrocytes
目的 探讨周期性机械应力条件下胰岛素样生长因子1型受体( IGF1R)对大鼠软骨细胞增殖及细胞外基质合成的影响.方法 体外分离培养大鼠软骨细胞,随机分为4组:加压0h组、加压0.5 h组、加压1 h组、加压2 h组,采用Western Blot法检测各组细胞IGF1R的表达及磷酸化水平,并在此基础上将同代无处理的软骨细胞在加压各组检测的同时给予同样检测即为静态组,应用Gel-Pro Analyzer软件进行半定量灰度分析比较各时间段静态和加压两两各组磷酸化 IGF1R/总IGF1R水平差异.另取大鼠软骨细胞随机分为静态组、加压对照组、IGF1R阻断组、加压后IGF1R阻断组,IGF1R阻断采用顺式-3-[8-胺基-1-(2-苯基-喹啉-7-基)-咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]-1-甲基-环丁醇(OSI-906)或者以IGF1R shRNA两种方式.阻断IGF1R 1 h后Western Blot法检测各组细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)表达及磷酸化水平;8 h后实时荧光定量PCR检测各组2型胶原(collagenⅡ)、蛋白聚糖(aggrecan)表达;3 d后采用直接细胞计数方式及细胞计数试剂盒(CCK-8)对软骨细胞增殖状况进行测定.应用SPSS 18 .0软件进行相关统计学分析,两组间差异采用t检验比较.结果 磷酸化IGF1R/总IGF1R蛋白水平在加压0 h组与静态组之间差异无统计学意义(t=0 .255, P=0 .811),而在0 .5 h组,1