目的探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤MG-63细胞诱导凋亡的作用及其对p27Kip1蛋白表达的影响.方法分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132培养p53突变型人骨肉瘤MG-63细胞、正常二倍体成纤维细胞WI-38和p53野生型人骨肉瘤U2OS细胞.通过MTT法检测不同培养时间的细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪定量检测不同时间的细胞凋亡发生率、Western blot检测p27Kip1表达情况.结果 MG132能选择性抑制人骨肉瘤MG-63和U2OS细胞生长,IC50分别为(0.92±0.06)μmol/L及(0.33±0.05)μmol/L,均低于二倍体成纤维WI-38细胞(9.13±0.12) μmol/L.1 μmol/LMG132处理MG-63细胞24 h后,DNA琼脂糖凝胶电泳可检测到典型的"阶梯状"DNA条带,而WI-38细胞则为基因组DNA.流式细胞仪于1 μmol/L MG132作用12 h后检测到明显的亚G1峰(凋亡细胞峰),且存在时效关系.Western blot发现,处理后p27Kip1蛋白表达明显上调.结论蛋白酶体抑制剂MG132在体外可选择性诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡.p27Kip1蛋白在诱导MG-63细胞凋亡中可能起重要作用.
作者：杨迪生；高翔；叶招明；陶惠民；李伟栩
来源：中华骨科杂志 2005 年 25卷 10期
