目的探讨Pannexin1(Px1)通道蛋白对微张力刺激下骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响。方法自Sprague Dawley大鼠(3周,雌雄不限,100~120 g)股骨和胫骨中提取全骨髓细胞进行原代培养。使用Px1通道蛋白抑制剂——甘珀酸/生胃酮(carbenoxolone,CBX)的安全剂量100μmol/L(通过CCK8细胞活性检测试剂测得)进行实验。利用全骨髓培养法培养原代大鼠MSCs,细胞传代至3~4代时,获得纯度较好的MSCs。将MSCs随机分为三组:对照组(MSCs既不经CXB处理也不施加微张力刺激)、微张力刺激组(4000μstrain)和微张力刺激+CBX组。微张力刺激时间为15 min,CBX预处理时间分别为3 h、6 h、12 h和24 h。测定碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原蛋白的表达、细胞内钙离子(Ca2+)的浓度,以及Px1通道蛋白、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p?p38 mitogen?activated protein kinase,p?p38MAPK)和p?ERK的表达活性。结果碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达活性在微张力刺激组最高,而使用CBX预处理后表达则不会升高。微张力刺激也可上调Ⅰ型胶原蛋白的表达,增加Ca2+浓度,上调Px1通道蛋白及p?p38MAPK的表达,使用CBX预处理会降低以上效果。但微张力刺激下p?ERK的下调表达不受CBX预处理的影
作者:李盛龙;王喆;张晓晶;汤欣
来源:中华骨科杂志 2017 年 37卷 1期