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目的 观察MDA-7/IL-24基因对不同p53状态人肝癌细胞HepG2、MHCC97L以及Hep3B和正常的肝细胞L02的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础.方法 将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和不同p53状态的肝癌细胞HepG2、MHCC97L、Hep3B.通过逆转录聚合酶链反应方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度,通过四甲基偶氮唑盐染色法及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,Annexin-V和碘化丙啶双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡,应用流式细胞仪检测细胞周期.结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2,MHCC97L和Hep3B以及正常细胞L02中高效表达.细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白表达.MDA-7/IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoechst染色提示MDA-7/IL-24促进肝癌细胞的凋亡,流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无影响,细胞周期分析提示MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞在G2/M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡作用和增殖阻滞作用.结论 复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2、MHCC97L和Hep3B,促进细胞

作者:薛新波;郑建伟;王从俊;陈堃;胡回忆;胡慧;于愿;吴在德

来源:中华肝脏病杂志 2006 年 14卷 9期

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作者:
薛新波;郑建伟;王从俊;陈堃;胡回忆;胡慧;于愿;吴在德
来源:
中华肝脏病杂志 2006 年 14卷 9期
标签:
癌,肝细胞 腺病毒,人 基因疗法
目的 观察MDA-7/IL-24基因对不同p53状态人肝癌细胞HepG2、MHCC97L以及Hep3B和正常的肝细胞L02的选择性杀伤作用,为肝癌的基因治疗提供理论基础.方法 将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和不同p53状态的肝癌细胞HepG2、MHCC97L、Hep3B.通过逆转录聚合酶链反应方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度,通过四甲基偶氮唑盐染色法及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用,Annexin-V和碘化丙啶双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡,应用流式细胞仪检测细胞周期.结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2,MHCC97L和Hep3B以及正常细胞L02中高效表达.细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白表达.MDA-7/IL-24能明显抑制各种肝癌细胞的生长,Hoechst染色提示MDA-7/IL-24促进肝癌细胞的凋亡,流式细胞仪提示MDA-7能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无影响,细胞周期分析提示MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞在G2/M期,同时对正常的肝细胞没有促凋亡作用和增殖阻滞作用.结论 复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性地杀伤肝癌细胞HepG2、MHCC97L和Hep3B,促进细胞