目的 探讨乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白(HBx)抑制细胞色素P450 2E1 (CYP2E1)表达的作用机制及其对肝细胞癌转移的影响.方法 将CYP2E1启动子区域划分为10个不同长度的片段并分别克隆到质粒PGL3-Basic上,与HBx表达载体(pCMV-2B-FLAG-Ⅹ)共转染于HepG2细胞中测定荧光素酶活性以确定HBx作用区域.凝胶电泳迁移率试验分析转录因子与DNA的结合；CCK-8检测细胞的增殖；细胞的侵袭测定采用Martrigel试验.增殖试验、侵袭试验数据比较用t检验；荧光素酶活性数据比较采用方差分析.结果 通过对CYP2E1启动子的缺失分析,重组子P8(删除-483 ～-274bp后的P7部分)活性与P7比较明显增高,达216.69％(F=142.13,P=0.002),确定HBx作用区域位于P7 (-483 ～-274 bp),进而通过MatInspector分析该区域存有肝细胞核因子4α (HNF4α)与胆固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)两转录因子结合位点并对该两序列进行突变分析,将mut-HNF4 α、mut-SREBP-1及mut-Duel重组质粒与或不与pCMV-2BFLAG-Ⅹ蛋白表达载体转染HepG2细胞,测定荧光素酶活性,分别为8.6％、24.44％、147.24％,进一步证实转录因子HNF4 α与SREBP-1参与HBx对CYP2E1的调控(F=112.24,P=0.001);凝胶电泳迁移率试验结果显示转录因子HNF4 α与SREBP-1是通过与CYP2E1启动子的结合而发挥作用；CCK

作者：谢斌；吴刚；陈平；刘坤；袁涛

来源：中华肝脏病杂志 2014 年 22卷 2期