目的 构建果糖-1,6-二磷酸酶1 (FBP1)重组腺病毒,并探究FBP1对肝癌细胞(HepG2)自噬及增殖的影响. 方法 PCR扩增FBP1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAdTrack-TO4,构建重组腺病毒质粒pAdTrack-FBP1,将重组腺病毒质粒用Lipofectamine3000转染至HEK293细胞中,包装、扩增获得高滴度重组腺病毒AdFBP1.用重组腺病毒AdFBP1感染HepG2细胞,同时设置Mock组和AdGFP组.通过Western blot技术和激光共聚焦技术观察FBP1对肝癌细胞自噬水平的影响,进一步通过克隆形成实验和MTS实验观察FBP1对肝癌细胞增殖能力的影响.组间均数比较采用t检验、单因素方差分析. 结果 成功构建高滴度重组腺病毒FBP1.Western blot和激光共聚焦检测结果显示,与AdGFP组相比,AdFBP1组自噬水平明显降低.Western blot结果表明,AdGFP组的LC3Ⅱ蛋白相对表达水平为1.10±0.10,AdFBP1组的为0.30±0.01,F=90.36,P＜0.01.激光共聚焦结果表明,AdGFP组肝癌细胞的平均自噬体数量为(28.33±1.53)个,AdFBP1组的为(12.33±1.53)个,F=97.40,P＜0.01.另外,克隆形成实验和MTS实验结果显示,与AdGFP组相比,AdFBP1组肝癌细胞的增殖明显受到抑制.克隆形成实验结果表明,AdGFP组的细胞克隆为(65.66±2.57)个,AdFBP1组的细胞克隆为(34.00±2.00)个,F=141.50,P＜0.01.MTS实验结

作者：潘璇明；张桂冀；陈雪梅；梁利；唐霓；汪凯

来源：中华肝脏病杂志 2019 年 27卷 9期