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目的 探讨野生型(wt)-p53 与JunB 融合基因对裸鼠肝细胞肝癌(肝癌)移植瘤的抑制作用.方法 分别应用携带绿色荧光蛋白(GFP) 的wt-p53 与JunB 融合基因质粒和脂质体Lipofectmine 2000 (融合基因载体)、携带GFP 的空质粒和Lipofectmine 2000 (空载体) 及单纯Lipofectmine 2000 转染HepG2 肝癌细胞.应用G418 筛选抗生素培养基筛选阳性克隆,应用逆转录聚合酶链反应进行阳性克隆鉴定.将18 只BALB/c 裸鼠按随机数字表法随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,每组6 只,分别取融合基因载体、空载体转染的HepG2 肝癌细胞及单纯的HepG2 肝癌细胞接种裸鼠,将2×107 个肿瘤细胞悬液皮下注射至裸鼠右侧背部,于注射后的28 d 处死荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积和重量,计算肿瘤抑制率.3 组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤重量比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t 检验.结果 融合基因载体和空载体转染HepG2 肝癌细胞24 h 后,转染效率均达到40豫.G418 筛选抗生素培养基筛选10 d,融合基因载体和空载体转染的HepG2 肝癌细胞出现较大的单细胞阳性克隆,扩大培养后获得稳定表达融合基因的HepG2 细胞.凝胶电泳显示融合基因载体转染的HepG2 肝癌细胞的p53 和JunB 基因表达量较空载体转染的肝癌细胞增高.融合基因载体转染的HepG2 肝癌细胞的p

作者:郭成;段建峰;刘青光;张雷;杨雪;宋涛;姚英民

来源:中华肝脏外科手术学电子杂志 2013 年 2卷 3期

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作者:
郭成;段建峰;刘青光;张雷;杨雪;宋涛;姚英民
来源:
中华肝脏外科手术学电子杂志 2013 年 2卷 3期
标签:
基因融合 转染 小鼠,近交BALB C 肿瘤移植
目的 探讨野生型(wt)-p53 与JunB 融合基因对裸鼠肝细胞肝癌(肝癌)移植瘤的抑制作用.方法 分别应用携带绿色荧光蛋白(GFP) 的wt-p53 与JunB 融合基因质粒和脂质体Lipofectmine 2000 (融合基因载体)、携带GFP 的空质粒和Lipofectmine 2000 (空载体) 及单纯Lipofectmine 2000 转染HepG2 肝癌细胞.应用G418 筛选抗生素培养基筛选阳性克隆,应用逆转录聚合酶链反应进行阳性克隆鉴定.将18 只BALB/c 裸鼠按随机数字表法随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,每组6 只,分别取融合基因载体、空载体转染的HepG2 肝癌细胞及单纯的HepG2 肝癌细胞接种裸鼠,将2×107 个肿瘤细胞悬液皮下注射至裸鼠右侧背部,于注射后的28 d 处死荷瘤裸鼠,测量肿瘤体积和重量,计算肿瘤抑制率.3 组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤重量比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t 检验.结果 融合基因载体和空载体转染HepG2 肝癌细胞24 h 后,转染效率均达到40豫.G418 筛选抗生素培养基筛选10 d,融合基因载体和空载体转染的HepG2 肝癌细胞出现较大的单细胞阳性克隆,扩大培养后获得稳定表达融合基因的HepG2 细胞.凝胶电泳显示融合基因载体转染的HepG2 肝癌细胞的p53 和JunB 基因表达量较空载体转染的肝癌细胞增高.融合基因载体转染的HepG2 肝癌细胞的p