目的 探讨重组真核表达质粒pcDNA3.1/人TSH受体(hTSHR)体外转染TSHR表达下降的低分化滤泡状甲状腺癌细胞株后,细胞摄取放射性碘功能以及甲状腺癌相关基因mRNA表达 的变化.方法 pcDNA3.1/hTSHR转化DH5a感受态菌,进行扩增、酶切,再以核苷酸测序方法鉴定.体外转染pcDNA3.1/hTSHR,通过免疫荧光检测TSHR表达产物,井型γ计数仪检测摄碘率,相对定量实时荧光PCR验证其表达的TSHR蛋白功能和特性.采用SPSS 13.0软件,对计量资料行t检验.结果pcDNA3.1/hTSHR经PCR扩增hTSHR-cDNA片段约113 kb,Kpn Ⅰ和Xha Ⅰ双酶切:hTSHR-cDNA的片段约2.3 kb,pcDNA3.1(+)的片段约5.5 kb,均同预期片段大小相符;核苷酸测序方法鉴定测序结果与GenBank中收录的hTSHR全长序列一致,表明真核表达质粒构建正确.在hTSH刺激下,转染pcDNA3.1/hTSHR细胞与转染pcDNA3.1(+)细胞比较:(1)在甲状腺肿瘤细胞胞质、胞膜有增强的绿色荧光,(2)前者125 I摄取率是后者的2.9倍(t=28.63,P＜0.01),(3)甲状腺碘摄取相关基因TSHR、钠碘转运体(NIS)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、Tg的mRNA的表达分别升高1.74倍(t=5.959,P＜0.01)、7.2倍(t=3.807,P＜0.05)、2.88倍(t=4.769,P＜0.01)和2.67倍(t=6.388,P＜0.01).结论 pcDNA3.1/hTSHR体外转染甲状腺癌肿瘤细胞后,可有效提高碘

作者：侯莎莎；王辉；冯方；林宁；傅宏亮；杜学亮；吴靖川

来源：中华核医学杂志 2011 年 31卷 2期