目的为筛选和克隆与口腔鳞癌增殖相关的新基因,构建酵母双杂交系统用诱饵蛋白融合质粒.方法从pGBT9-pRb中酶切、电泳鉴定、回收Rb基因,将其连接至酵母双杂交系统诱饵蛋白质粒载体pGBKT7中,构建重组质粒pGBKT7-pRb,并经鉴定、测序、体外翻译、转录等方法验证后,将重组质粒转化酵母Y187,测定其在Y187中的自激活现象及毒性.然后,提取转化后的酵母总蛋白,经Western blot 检测该重组质粒在Y187内的表达情况,以鉴定其作为诱饵蛋白的可行性.结果 Rb基因经酶切、电泳后,大小正确,割胶回收,与质粒pGBKT7 24 h连接,转化大肠杆菌DH5α,挑选重组质粒,测序结果与Genbank中Rb序列比对完全正确.重组质粒pGBKT7-pRb双酶切鉴定、体外翻译、转录试验,Western blot等方法均证实重组质粒中的Rb基因能够正确合成Rb蛋白.转化酵母后排除重组质粒的自激活作用.结论构建重组质粒pGBKT7-pRb,能够在Y187内正确表达,可作为酵母双杂交系统用诱饵蛋白.
作者：徐篌；张萍；陈万涛；张志愿
来源：中华口腔医学杂志 2004 年 39卷 3期
