目的 以人源A549细胞为研究对象,体外构建百草枯(Paraquat,PQ)细胞模型,探讨血小板反应蛋白(Thrombospondin,TSP)及其受体CD47在PQ致肺纤维化中的作用.方法 体外培养人源A549细胞,实验分为正常组、PQ组、Anti-TSP1组(PQ+终浓度为10 μg/ml的TSP1中和抗体).采用CCK8法检测不同浓度PQ(50、100、200、400、600、800、1 000 μmol/L)在不同时间(12、24、48 h)对细胞存活率的影响,以细胞半数存活率为标准筛选出作用于后续试验的浓度和时间点;倒置显微镜观察细胞形态变化;采用酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法测定纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原的表达量;免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)法观察TSP-1、CD47的蛋白表达情况;免疫荧光双染(Immunofluorescence double staining)观察TSP-1、CD47共表达;实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT-PCR)检测TSP-1、CD47 mRNA的表达量,Western印迹法(Western Blot,WB)检测TSP-1、CD47蛋白表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平.结果 PQ作用时间一定时,细胞活性随PQ浓度增加而降低.正常组细胞间连接紧密,呈鹅卵石状,排列整齐,岛状或成团生长;PQ组细胞随着PQ浓度增加,细胞间隙逐渐增大,形态逐渐变得不均一,

作者：高薇；谢席胜

来源：中华劳动卫生职业病杂志 2018 年 36卷 9期