目的:探究矽肺早期炎症中环状RNA(circRNA)的氮6-腺苷酸甲基化修饰(m6A)差异,分析circRNA参与矽肺进程的分子机制。方法:体外培养人单核细胞系(THP-1)诱导的巨噬细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞活化标志物,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活力,确定二氧化硅(SiO
2)刺激浓度。比色法测定矽肺模型中总RNA的m6A甲基化修饰变化,检测m6A甲基化酶、去甲基酶和阅读蛋白表达情况。Arraystar m6A-circRNA表观转录组芯片检测二氧化硅模型组和对照组小鼠肺组织中m6A修饰差异表达的circRNA,并用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证遴选出高表达circRNA。
结果:SiO
2浓度为50 μg/cm
2时对THP-1诱导的巨噬细胞活化标志物和细胞活性影响最为明显(
P<0.05)。与对照组比较,SiO
2引起小鼠原代巨噬细胞和THP-1诱导的巨噬细胞总RNA的m6A水平升高,甲基化酶METTL3和阅读蛋白YTDHF3表达量明显升高,差异均有统计学意义(
P<0.05)。与对照组比较,矽肺模型小鼠肺中132个circRNA的m6A甲基化修饰水平升高,296个circ RNA的m6A甲基化修饰水平下降,基于基础表达量筛选得到靶标-circSLC2A13;SiO
2引起巨噬细胞中circSLC2A13的表达和m6A化修饰明
作者:罗薇;王莎;李永琪;王静;杨少奇;巢杰
来源:中华劳动卫生职业病杂志 2021 年 39卷 12期