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目的 利用RNA干扰(RNAi)技术使细丝蛋白(FLN)mRNA表达降低,抑制FLN在血管平滑肌细胞(VSMC)中的生成.方法 采用RNAi技术建立FLN表达下调VSMC模型,设计3条可诱发FLN mRNA表达基因沉默的小分子RNA(SiRNA)片段,根据构建质粒载体并转染VSMC的不同,建立7-1、7-2、7-3组和正常对照组、空白载体组5组转染细胞模型,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白标记物的表达并鉴定转染效率,荧光定量PCR鉴定FLN mRNA抑制效果.Western blot检测FLN蛋白的表达.结果 设计的3条SiRNA均可有效抑制FLN mRNA的表达.其中7-1和7-2组抑制效果最明显,可达60

作者:朱光明;张微微;陈冰璞;李娟

来源:中华老年心脑血管病杂志 2008 年 10卷 1期

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作者:
朱光明;张微微;陈冰璞;李娟
来源:
中华老年心脑血管病杂志 2008 年 10卷 1期
标签:
肌细胞,平滑肌 RNA 干扰 转染 信号传导 质粒
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术使细丝蛋白(FLN)mRNA表达降低,抑制FLN在血管平滑肌细胞(VSMC)中的生成.方法 采用RNAi技术建立FLN表达下调VSMC模型,设计3条可诱发FLN mRNA表达基因沉默的小分子RNA(SiRNA)片段,根据构建质粒载体并转染VSMC的不同,建立7-1、7-2、7-3组和正常对照组、空白载体组5组转染细胞模型,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白标记物的表达并鉴定转染效率,荧光定量PCR鉴定FLN mRNA抑制效果.Western blot检测FLN蛋白的表达.结果 设计的3条SiRNA均可有效抑制FLN mRNA的表达.其中7-1和7-2组抑制效果最明显,可达60