目的 构建肝细胞生长因子(HGF)真核细胞表达质粒pEGFP-HGF-C1,并观察该质粒对大鼠急性缺血肢体血管新生的作用. 方法 构建含有人HGF cDNA全长的真核细胞表达质粒pEGFP HGF-C1；脂质体法向大鼠原代骨骼肌细胞转染质粒并测定转染效率；酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中HGF蛋白表达浓度.建立大鼠急性缺血肢体模型；裸质粒pEGFPHGF-C1 200 μg/500μl行缺血肢体肌肉注射,术后第3、6、9天取标本行HGF免疫组织化学和蛋白印迹检测；术后第24天取标本行毛细血管密度测定,评价血管新生情况. 结果 成功构建含人HGF cDNA的真核细胞表达质粒pEGFP- HGF-C1,且可有效转染原代培养的大鼠骨骼肌细胞(0.8％),并表达HGF,第4天达到高峰为(5402.0±227.9)ng/L；蛋白印迹和免疫组织化学法均显示于术后第3、6、9天HGF表达量高于空载和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；术后第24天治疗组毛细血管密度为10.81±2.35,与空载组6.11±0.90和空白组5.45±0.90比较,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 构建的质粒pEGFP-HGF-C1转染大鼠肌肉组织后表达的HGF促进了缺血部位的血管新生.
作者：孙晋津；陈博；郭亮；陈剑秋
来源：中华老年医学杂志 2012 年 31卷 9期
