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目的 评价葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系.方法 H9c2细胞在含10%胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于96孔板(100μl/孔)或6孔板(2 ml/孔),接种密度10 5个/ml,接种12 h后细胞贴壁.采用随机数字表法,将细胞分为6组(n=24):正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧复氧组(NHR组)、正常糖瑞芬太尼后处理组(NRP组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖瑞芬太尼后处理组(HRP组).NC组、NHR组和NRP组细胞换用正常糖DMEM培养基(5.5 mmol/L)培养48 h;HC组、HHR组和HRP组细胞换用高糖DMEM培养基(25.0 mmol/L)孵育48 h.NHR组、NRP组、HHR组和HRP组弃去培养液,加入Tyrode液,将培养板置于95%N2-5%CO2培养罐中孵育5h,NHR组和HHR组更换为含10%胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1h,NRP组和HRP组更换为含终浓度为1μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1h.于复氧1h时,每组取9孔细胞,采用CCK8法检测细胞活力;每组取12孔细胞,采用化学比色法测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;每组取3孔细胞,采用Western blot法测定GRP78表达.结果 与NC组比较,NHR组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调(P<0.05);与NHR组比较,NRP组细胞活力升高,LDH活性降低,GRP78表达下调,HRP组细胞活力降

作者:陈满丽;陈立建;万俐娟;张雷;都建;顾尔伟

来源:中华麻醉学杂志 2015 年 35卷 6期

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作者:
陈满丽;陈立建;万俐娟;张雷;都建;顾尔伟
来源:
中华麻醉学杂志 2015 年 35卷 6期
标签:
热休克蛋白质类 糖尿病 哌啶类 心肌再灌注损伤 缺血后处理 Heat-shock proteins Diabetes mellitus Piperidines Myocardial reperfusion injury Ischemic postconditioning
目的 评价葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系.方法 H9c2细胞在含10%胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于96孔板(100μl/孔)或6孔板(2 ml/孔),接种密度10 5个/ml,接种12 h后细胞贴壁.采用随机数字表法,将细胞分为6组(n=24):正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧复氧组(NHR组)、正常糖瑞芬太尼后处理组(NRP组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖瑞芬太尼后处理组(HRP组).NC组、NHR组和NRP组细胞换用正常糖DMEM培养基(5.5 mmol/L)培养48 h;HC组、HHR组和HRP组细胞换用高糖DMEM培养基(25.0 mmol/L)孵育48 h.NHR组、NRP组、HHR组和HRP组弃去培养液,加入Tyrode液,将培养板置于95%N2-5%CO2培养罐中孵育5h,NHR组和HHR组更换为含10%胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1h,NRP组和HRP组更换为含终浓度为1μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1h.于复氧1h时,每组取9孔细胞,采用CCK8法检测细胞活力;每组取12孔细胞,采用化学比色法测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;每组取3孔细胞,采用Western blot法测定GRP78表达.结果 与NC组比较,NHR组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调(P<0.05);与NHR组比较,NRP组细胞活力升高,LDH活性降低,GRP78表达下调,HRP组细胞活力降