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目的 评价富氢盐水减轻脓毒症小鼠肺损伤时自噬与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系.方法 清洁级健康雄性C57BL小鼠36只,体重20~25 g,6周龄,采用随机数字表法分为6组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症+富氢盐水组(Sep+H2组)、脓毒症+富氢盐水+雷帕霉素组(Sep+H2+Rap组)、脓毒症+富氢盐水+3-甲基腺嘌呤组(Sep+H2+3-MA组)和脓毒症+富氢盐水+MCC950组(Sep+H2+M组).采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备小鼠脓毒症模型.Sep+H2组、Sep+H2 +Rap组、Sep+ H2+3-MA组和Sep+H2+M组于CLP术后1和6h时腹腔注射富氢盐水5ml/kg.于CLP术后lh时,Sep+ H2+ Rap组腹腔注射自噬激动剂雷帕霉素10 mg/kg,Sep+H2+3-MA组腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤15 mg/kg,Sep+H2+M组腹腔注射NLRP3炎症小体抑制剂MCC950 50 mg/kg.造模后24 h时,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度;然后断颈法处死小鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,并行病理学损伤评分,测定湿重/干重比值(W/D比值),采用分光光度计法测定MPO活性,采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量,采用Western blot法测定pro-caspase-1 P10、NLRP3和凋亡相关点状蛋白(ASC)的表达.结果 与Sham组比较,Sep组和Sep+H2组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤

作者:张杨;陈红光;谢克亮;于泳浩

来源:中华麻醉学杂志 2019 年 39卷 11期

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作者:
张杨;陈红光;谢克亮;于泳浩
来源:
中华麻醉学杂志 2019 年 39卷 11期
标签:
氢 脓毒症 急性肺损伤 NLR家族,热蛋白结合域包含蛋白3 自噬
目的 评价富氢盐水减轻脓毒症小鼠肺损伤时自噬与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系.方法 清洁级健康雄性C57BL小鼠36只,体重20~25 g,6周龄,采用随机数字表法分为6组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症+富氢盐水组(Sep+H2组)、脓毒症+富氢盐水+雷帕霉素组(Sep+H2+Rap组)、脓毒症+富氢盐水+3-甲基腺嘌呤组(Sep+H2+3-MA组)和脓毒症+富氢盐水+MCC950组(Sep+H2+M组).采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备小鼠脓毒症模型.Sep+H2组、Sep+H2 +Rap组、Sep+ H2+3-MA组和Sep+H2+M组于CLP术后1和6h时腹腔注射富氢盐水5ml/kg.于CLP术后lh时,Sep+ H2+ Rap组腹腔注射自噬激动剂雷帕霉素10 mg/kg,Sep+H2+3-MA组腹腔注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤15 mg/kg,Sep+H2+M组腹腔注射NLRP3炎症小体抑制剂MCC950 50 mg/kg.造模后24 h时,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定蛋白浓度;然后断颈法处死小鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,并行病理学损伤评分,测定湿重/干重比值(W/D比值),采用分光光度计法测定MPO活性,采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量,采用Western blot法测定pro-caspase-1 P10、NLRP3和凋亡相关点状蛋白(ASC)的表达.结果 与Sham组比较,Sep组和Sep+H2组BALF蛋白浓度、肺组织病理学损伤