目的:构建小鼠特异性乳酸脱氢酶(LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定.方法:提取小鼠睾丸总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增小鼠LDH-C亚基编码序列,PCR产物经BamH I/EcoR I双酶切后,克隆至谷胱甘肽S转移酶(GST)融合表达载体pGEX-2T中,在E.co? BL21中诱导GST融合蛋白的表达.结果:在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为60 000的产物.对重组质粒的序列分析表明,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致.结论:小鼠LDH-C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T,并在E.coli BL21中获得高表达.
作者：熊永忠；郑德柱；谢飞；涂向东；兰风华
来源：中华男科学 2004 年 10卷 1期
