目的 探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA(siRNA)对黑素瘤细胞侵袭的影响.方法 根据MK基因mRNA序列特点,设计并用化学方法合成3个siRNA,转染人黑素瘤A375细胞后,以荧光实时定量PCR方法筛选出效果最好的siRNA,以此siRNA转染人黑素瘤A375细胞.同时设空白对照组(不予任何处理)和空载对照组(仅用脂质体转染).分别以荧光实时定量PCR和Western印迹方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝法检测细胞黏附率,以Boyden小室模型方法检测细胞侵袭力.结果 所设计的siRNA均能有效下调MK基因mRNA表达水平,以S3号作用最强.以该siRNA转染A375细胞后,荧光实时定量PCR结果显示,转染组A375细胞MK基因mRNA水平明显下降,且呈浓度(24 h时r=-0.906;48 h时r=-0.922;72 h时r=-0.939,P均<0.01)和时间(3.125 nmol/L r=-0.889;6.25 nmol/L r=-0.935;12.5 nmol/L r=-0.928,P均<0.01)依赖性.细胞黏附试验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组黏附率分别为73.66
作者：周永静；龚丹丹；邱志远；彭辉勇；范钰
来源：中华皮肤科杂志 2011 年 44卷 7期
